高灵敏细胞碱性磷酸酶检测试剂盒

ALP试剂盒
 
 产品信息 

 
 
 产品描述 
 
碱性磷酸酶（Phosphatase Alkline, ALP/AP/AKP/ALKP/ALPase）碱性条件下能催化磷酸单酯水解，常见底物有对硝基苯酚磷酸、磷酸苯酯等。碱性磷酸酶的活性变化与一系列生理和病理变化紧密相关，比如骨骼发育、骨骼相关疾病等。其中，ALP作为成骨细胞的副产物，血清中ALP升高和骨发育密切相关。同时，其经常作为成骨分化的早期指标进行检测。
 
本试剂盒能对细胞裂解液样品中的内源性碱性磷酸酶活性进行测定。原理在于：对硝基苯酚磷酸盐是一种常见的碱性磷酸酶显色底物，碱性条件下能被ALP催化成对硝基酚，呈黄色产物，可在405nm检测到吸光度。产物黄色越深，代表ALP活性越高，反之则酶活性越低。通过比色分析可定量检测ALP水平。
 
本试剂盒可检测96个样本，包括标准品和空白对照。建议48孔板，＞20000个/孔细胞进行检测。
 
 产品优势 
 
1 试剂盒组分齐全，无需另外准备细胞裂解液，且裂解步骤简便易操作。
2 标准品浓度梯度已提供，无需二次配制。
3 计算公式简便，结果精确。
 
 产品组成 
 

 
 操作步骤 
 
1．样品准备
 
（1）细胞裂解：样品弃去培养液后，PBS（磷酸盐缓冲液）反复冲洗3次，吸净PBS，加入细胞裂解液A（建议48孔板，200ml/孔），样本-20℃或-80℃，深度冻存过夜。
 
（2）样品的稀释：若样品中含有较高的ALP活性，可以使用本品中的裂解液（去离子水）进行稀释。
 
2．试剂准备：将所有试剂取出，恢复至室温待用。
 
（1）配置显色底物溶液：显色底物C1离心，确保检测基质位于管底，取5.5ml反应液C2至离心后的显色底物C1离心管中，充分溶解混匀，冰上放置。新鲜配置的显色底物溶液需在6小时内使用。
 
（2）标准品：标准品B(1-7)用前充分混匀。标准品浓度设置见下表
 

 
3. 加样
 
参考下表使用96孔板设置标准品孔（标准品1孔即为空白对照孔）和样品孔。标准品及样品用量均为100μl/孔。如样品中的ALP活性过高，可以用裂解液或者PBS稀释后再进行测定。
 

（根据实验要求设置标准品及样品副孔数量）
 
4. 混匀：用枪头轻轻吹打或摇床混匀。
 
5. 孵育：37℃孵育60min（若待测样品中ALP活性较高，可适当缩短孵育时间）。
 
6. 终止：每孔加入100μl反应终止液D。（此时，标准孔及有ALP活性的孔会呈现不同深浅的黄色）
 
7.检测：细胞冷却5-10min至室温，405nm测定吸光度。如不能测定405nm时的吸光度，也可以在400-415范围内检测吸光度。如不能立即测定，可以在2小时内完成测定，所显示的颜色在2小时内稳定。
 
8.结果分析：根据各标准品浓度及对应吸光度绘制标准曲线。将样品孔吸光度代入所绘制的标准曲线，计算出样品中的ALP活性。稀释过的样品活性计算可乘以相应的稀释倍数。